Biología unicelular

Abstracto

Consecuencias multifuncionales de una única mutación del CFTR y la importancia de analizar las mutaciones mediante pruebas funcionales

Ladeveze V, Farhat R, El Seedy A y Kitzis A

La fibrosis quística es la enfermedad rara más frecuente en la población caucásica. Esta grave enfermedad hereditaria recesiva está causada por mutaciones en el gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR). Este gen codifica una proteína expresada en la membrana apical de las células epiteliales. Las mutaciones se clasifican en seis clases en función de sus efectos y la gravedad del fenotipo. La mutación F508del es la mutación más frecuente del gen CFTR; induce un plegamiento incorrecto de la proteína, bloqueando así su maduración, localización en la membrana y, en última instancia, su funcionalidad.

Este estudio combina un enfoque clínico y análisis celulares de múltiples niveles para determinar las consecuencias fisiopatológicas de la mutación del exón 10 del gen CFTR c.1392G>T (p.Lys464Asn), detectada en un paciente con fibrosis quística con una deleción por cambio de marco de lectura en trans y una TG(11)T(5) en cis. En primer lugar, se estudió el splicing mediante experimentos con minigenes, con diferentes alelos TG(m)T(n), y mediante extractos de ARNm de células nasales para determinar la consecuencia de c.1392G>T. A continuación, se evaluó el procesamiento de la proteína p.Lys464Asn, en celulosa, mediante análisis de transferencia Western.

La mutación c.1392G>T afecta el empalme del exón 10 al inducir su deleción completa y codificar una transcripción con cambio de marco de lectura. El polimorfismo TG (11)T(5) aumenta los efectos de esta mutación en el empalme aberrante, lo que sugiere la importancia del alelo complejo. El análisis del ARNm obtenido de las células epiteliales de las vías respiratorias maternas confirmó estos resultados in cellulo. A nivel de proteína, la proteína p.Lys464Asn no mostró una forma completamente glicosilada.

Por lo tanto, la mutación c.1392G>T sola o en asociación con el tracto poli T reveló impactos obvios en el empalme y el procesamiento de la proteína CFTR. El alelo complejo c.[T(5); 1392G>T] contribuye al fenotipo de fibrosis quística al afectar el empalme e inducir un grave defecto de procesamiento. Estos resultados demuestran que la clasificación clásica de las mutaciones CFTR no es suficiente: se requieren estudios in vivo e in cellulo de un posible alelo complejo en un paciente para proporcionar una clasificación correcta de la mutación CFTR, asesoramiento médico adecuado y estrategias terapéuticas adaptadas.