Revista de tecnología microbiana y bioquímica

Abstracto

Sobreexpresión de un gen de quitinasa del hongo termófilo Thermomyces lanuginosus en Saccharomyces cerevisiae y caracterización de la quitinasa recombinante

M. Prasad y P. Palanivelu

Se ha clonado y sobreexpresado un gen de quitinasa del hongo termófilo Thermomyces lanuginosus ATCC 44008 en Saccharomyces cerevisiae SEY 2101. La quitinasa recombinante se produjo como proteína secretada soluble. Se encontró que la actividad enzimática era máxima el cuarto día a 30 °C en el medio de inducción. La quitinasa sobreexpresada mostró una actividad óptima a pH 6,5 y a 60 °C. La quitinasa recombinante atribuyó una termoestabilidad notable al mantener más del 60% de la actividad enzimática después de 6 h a 50 °C. La masa molecular de la quitinasa sobreexpresada fue de 42 kDa, medida por SDS-PAGE. Se encontró que los parámetros cinéticos como KM y Vmax de la enzima eran 0,403 mM y 8,74 mmoles/min/mg de proteína, respectivamente. La síntesis de la quitinasa recombinante fue fuertemente reprimida por la glucosa. El inhibidor de la traducción eucariota, cicloheximida, en el medio de inducción mostró un 10% más de actividad, mientras que los inhibidores de la transcripción, a saber, 8-azaguanina y 8-hidroxiquinolina, inhibieron el 30% de la actividad. La quitinasa recombinante sobreexpresada puede encontrar una aplicación potencial en la industria farmacéutica para preparar quitooligosacáridos.