Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Producción de células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo equino de grado de buenas prácticas de fabricación para uso terapéutico

Shashank Gowda, Aarya Hari, Basavaraj Chougule, Manoj Kumar Reddy, Abhishek Chandanan, Minita Sodhi, Nicole Koshy, Lyle Fonseca y Satish Totey

Las células madre mesenquimales (MSC) se están evaluando actualmente en estudios clínicos equinos por su potencial para tratar diversos trastornos y lesiones. Los estudios han demostrado que tanto las células madre autólogas como las alogénicas parecen ser seguras. Sin embargo, se justifica un método de expansión celular eficiente que sea confiable y rentable para proporcionar células madre de calidad clínica listas para usar. Nuestro estudio tuvo como objetivo determinar las condiciones de cultivo óptimas para una expansión eficiente de células madre a gran escala. Producimos células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo equino estándar cGMP a gran escala. Se utilizaron cinco combinaciones de medios diferentes (medio de Eagle modificado por Dulbecco y knockout [DMEM-KO], medio esencial mínimo modificado por alfa [α-MEM], 50:50 DMEM-KO/α-MEM, 75:25 DMEM-KO/α-MEM y 25:75 DMEM-KO/α-MEM) con densidades de siembra de 1000, 2000, 3000, 4000 y 5000 células/cm2 para determinar las condiciones óptimas de cultivo para la producción a gran escala. Se analizaron la cinética de crecimiento, los inmunofenotipos, los cariotipos, la morfología, la diferenciación trilinaje, la proliferación de células T, la positividad del virus, la toxicidad preclínica y la expresión de marcadores de pluripotencia. Entre las combinaciones de medios y densidades de siembra probadas, se encontró que la combinación 25:75 DMEM-KO/α-MEM a una densidad de siembra de 5000 células/cm2 era óptima para la expansión a gran escala. Esta combinación de medios dio un rendimiento celular significativamente mayor que las otras combinaciones de medios, al tiempo que conservaba sus características de células madre y su potencial de diferenciación. Los resultados indicaron que la adopción de un sistema de cultivo apropiado mejoró significativamente el rendimiento celular, lo que permitió la producción de suficientes células para la aplicación terapéutica de una manera rentable. Los resultados también mostraron que el método de expansión a gran escala requiere una manipulación mínima de las células y podría expandirse ex vivo en dos pases al tiempo que conserva las características de las células madre verdaderas.