Pharmaceutica Analytica Acta

Abstracto

Perfil de la actividad de la lipasa monoacilglicerina en el cerebro de ratas mediante un ensayo de cromatografía líquida con espectrometría de masas de ionización por electrospray positiva con monitorización de iones seleccionados y mejorado con aducto de amoníaco

Gary W Caldwell y Wensheng Lang

Los 2-araquidonoilgliceroles (2-AG) son uno de los principales endocannabinoides del sistema nervioso central. La regulación positiva de la señalización de los endocannabinoides centrales mediante la inhibición selectiva de la actividad de la monoacilglicerol lipasa (MAGL) cerebral es un posible enfoque terapéutico para la modulación del dolor, la obesidad y la diabetes, por nombrar algunos. Por lo tanto, un método analítico sensible y confiable para la determinación de los niveles de endocannabinoides en el cerebro es esencial para el descubrimiento de inhibidores de MAGL. La medición precisa de los niveles de monoacilglicéridos (MAG), mediante cromatografía líquida con espectrometría de masas de ionización por electrospray positiva (LC/+ESI/MS) y espectrometría de masas en tándem, es un desafío ya que los endocannabinoides cerebrales no solo son susceptibles al estrés en la fase de estudio en vida, sino que también son propensos al metabolismo post mortem, la migración de acilo (es decir, la conversión de 2-MAG a 1(3)-MAG), la formación de iones de aducción de metales y la hidrólisis química generando los mismos productos que los de la enzima objetivo. Para evitar estos artefactos, hemos desarrollado un método simple de LC/+ESI/MS para la detección directa de cationes de aducción de amonio de los principales MAG en el modo de monitoreo de iones seleccionados (SIM). Para el ensayo de inhibición de MAGL in vitro, se utilizó una elución isocrática de LC para la separación de línea base de los MAG y sus isómeros de migración de acilo producidos durante la incubación a 37 °C con homogeneizado de cerebro de rata. Para minimizar el metabolismo post mortem y la isomerización de las MAG para estudios in vivo, el cerebro de rata se homogeneizó directamente en cuatro mililitros de etanol por cada gramo de tejido cerebral y se aplicó una elución de gradiente LC lineal para el perfil amplio de endocannabinoides. Se ha demostrado que el método SIM LC / +ESI / MS es útil para la evaluación cerebral in vitro de la potencia inhibidora de MAGL e inhibidores de la amida hidrolasa de ácidos grasos (FAAH) y para la evaluación cerebral in vivo para estudios de compromiso de objetivos.