Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Purificación de neuronas inmaduras a partir de células madre neuronales diferenciadas mediante un sencillo método de agitación

Hassan Azari, Sharareh Sharififar, Roya P Darioosh, Maryam Rahman, Jeff M Fortin y Brent A Reynolds

Objetivo: Las poblaciones de células neuronales enriquecidas son herramientas valiosas tanto para las investigaciones de laboratorio como para las aplicaciones de terapia celular. Sin embargo, los métodos de purificación de células disponibles exigen equipos costosos como FACS o MACS que limitan su accesibilidad universal. En este estudio, desarrollamos un método eficiente para purificar células neuronales inmaduras de la progenie de células madre neuronales diferenciadoras (dNSC) en función de sus propiedades de adhesión diferencial al sustrato sin utilizar herramientas costosas de separación de células. Métodos: Las células madre neuronales se extrajeron de la eminencia ganglionar de cerebros de ratones embrionarios de 14 días utilizando el ensayo de neuroesferas. Luego, las neuroesferas se disociaron en células individuales y se diferenciaron empleando el método de ensayo de neuroblastos. Después de una breve tripsinización, el cultivo de dNSC se agitó suavemente a 150 rpm durante 30 minutos para separar los grupos de células neuronales superiores de la monocapa de células astrocíticas subyacente. El rendimiento de la purificación neuronal, la contaminación de astrocitos y la presencia de células en división se compararon con un método de purificación MACS utilizando el anticuerpo PSANCAM. Resultados: Mientras que se logró un rendimiento neuronal de 97,1 ± 0,45% utilizando MACS; alcanzó 97,9 ± 0,6% utilizando el método de agitación que no fue significativamente diferente. Por otro lado, el porcentaje de astrocitos en el enfoque MACS fue de 1,18 ± 0,15%, pero disminuyó significativamente a 0,6 ± 0,15% utilizando el método de agitación. Además, 4,41 ± 0,23% y 5,3 ± 0,4% de las células aisladas en los métodos MACS y agitación, respectivamente, fueron células en división inmunorreactivas Ki-67, de las cuales 97,34 ± 1,6% y 97,9 ± 0,7% coexpresaban β III-tubulina, lo que confirma su identidad neuronal. Además, basándose en el ensayo de células formadoras de colonias neuronales, el método de agitación dio como resultado la generación de una población de células neuronales homogénea sin ninguna contaminación genuina de células madre neuronales. Conclusiones: El método de purificación por agitación permite una separación fácil, económica, eficiente y a gran escala de neuronas inmaduras de la progenie de células madre neuronales descentralizadas, lo que podría beneficiar tanto las aplicaciones básicas como las clínicas.