Bioquímica y Bioquímica Analítica

Abstracto

Detección rápida de proteínas mediante electroforesis en gel de poliacrilamida unidimensional utilizando un abrillantador óptico fluorescente económico

Sashidhar RB, Tanuja Kosuri y Sujata Nayak

Se ha empleado con éxito un abrillantador óptico fluorescente de tejidos comercial, Ranipal ^{® (F-OB), para teñir} proteínas en gel nativo y SDS -1D-PAGE. El F-OB se purificó utilizando un sistema de disolvente bifásico de diclorometano y agua. El valor de R _f (0,63) del F-OB purificado y crudo fue comparable en TLC. La espectrometría de masas del F-OB purificado indicó un pico de base a 414 (m/z). Se encontró que los máximos de absorción y emisión del F-OB eran 350 nm y 430 nm, respectivamente. El F-OB podía teñir las proteínas tanto antes como después de la electroforesis en gel nativo. La tinción postelectroforética fue rápida y requirió 20 min para visualizar las proteínas teñidas. Por otro lado, en geles SDS, se requirieron 20 min adicionales para la extracción de SDS antes de teñir las proteínas con F-OB. Se encontró que el SDS interfería con la unión del F-OB a las proteínas. Se cargaron concentraciones variables de marcadores de peso molecular y se representó gráficamente su intensidad fluorescente frente a la concentración de las proteínas. Los valores ^r2 oscilaron entre 0,965 y 0,997, lo que indica una linealidad excelente. La detección de anhidrasa carbónica se situó en el intervalo de 8,0 a 800 ng. A diferencia de la mayoría de los colorantes utilizados para la tinción de proteínas, la tinción con F-OB se pudo realizar en tampón de tanque (2 mg/100 mL) y también fue reversible. El F-OB, tal vez, sería el colorante fluorescente más rentable para teñir las proteínas (US$ 0,04/25,0 g). Se descubrió que el F-OB era un colorante fluorescente simple, seguro, sensible, que consume menos tiempo y es económico como alternativa para teñir proteínas en geles de poliacrilamida.