Revista de bioequivalencia y biodisponibilidad

Abstracto

Diálisis de equilibrio rápido (RED): una técnica de detección in vitro de alto rendimiento para la unión de proteínas plasmáticas utilizando plasma humano y de rata

Jitendra Kumar Singh, Anant Solanki, Reema C Maniyar, Debarupa Banerjee y Vikas S Shirsath

Determinar el grado en que una molécula se une a las proteínas plasmáticas es una fase crítica del desarrollo de fármacos porque la cantidad de fármaco unido al plasma influye en la dosificación del compuesto, la eficacia, la tasa de depuración y el potencial de interacciones farmacológicas. Por lo tanto, la determinación de las fracciones libres (%Fu) y unidas (%Bound) de un artículo de prueba en plasma es un parámetro crítico, que se determina de manera rutinaria en el proceso de descubrimiento y desarrollo de fármacos. Esta determinación es posible mediante diálisis de equilibrio, un método aceptado y estándar para la estimación confiable de la fracción de fármaco no unido en plasma. Aunque es el método preferido, la diálisis de equilibrio históricamente ha sido intensiva en mano de obra, demanda mucho tiempo, es prohibitiva en costos y difícil de automatizar. Se desarrolló un ensayo de unión de fármaco a proteína mediante diálisis de equilibrio rápido (RED) mediante LC-MS/MS utilizando una técnica novedosa que dio como resultado una precisión de ensayo significativamente mejorada y ofrece una ventaja de velocidad. Se probó un panel de compuestos que cubrían un rango de unión de proteínas esperada en plasma de especies humanas y de ratas. Se desarrolló un método sensible y selectivo que utiliza un espectrofotómetro de masas en tándem cuádruple interconectado con ionización por electrospray para la cuantificación de fármacos no unidos en plasma pretratado. Las fases móviles utilizadas fueron ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo: ácido fórmico al 0,1 % en agua con el método de HPLC de gradiente. La fracción no unida de fármacos se detectó mediante un espectrómetro de masas operado en modo ESI. Además, los datos de un conjunto de diez compuestos se compararon con los valores de la literatura. Con el método descrito, es posible examinar una cantidad relativamente grande de compuestos para PPB en un entorno de descubrimiento de fármacos.