Bioquímica y Bioquímica Analítica

Abstracto

Remodelación de las balsas lipídicas durante la capacitación in vitro y la reacción acrosómica de espermatozoides de carnero

Carmen Colas, Rosaura Perez-Pe, Adriana Casao, Mario Ollero, Lucia Calleja, Margarita Gallego, Teresa Muiño-Blanco and Jose A Cebrian-Perez

Antecedentes: Las balsas lipídicas se conocen a menudo como microdominios resistentes a los detergentes (DRM). Informamos por primera vez sobre la presencia de dos marcadores de balsas lipídicas, caveolina-1 y gangliósido GM1, en la superficie de espermatozoides de carnero, y el efecto de la capacitación in vitro y la reacción del acrosoma en las distribuciones de estos marcadores, el contenido proteico y la composición lipídica de las fracciones DRM y no DRM.

Métodos: La caveolina-1 y el gangliósido GM1 se detectaron mediante análisis inmunocitoquímico y de fluorescencia, respectivamente. Las fracciones DRM y no DRM se separaron mediante un gradiente de densidad OptiPrepTM. Se determinó el colesterol mediante fluorometría, el GM1 mediante reacción de peroxidasa, el contenido de proteínas mediante espectrofotometría y el perfil de ácidos grasos mediante cromatografía de gases.

Resultados: Caveolina-1 se evidenció en el acrosoma de 59,2 ± 4,3% de espermatozoides frescos, y la proporción de células teñidas aumentó (P<0,05) después de la capacitación. GM1 se detectó en el post-acrosoma y la cola de todos los espermatozoides, y no se encontró cambio después de la capacitación. El colesterol y GM1 se distribuyeron a lo largo del gradiente, con un pico en las fracciones DRM. Se encontró una mayor proporción (P<0,001) de ácidos grasos saturados en las fracciones DRM, confirmada por el índice de insaturación y una mayor relación lípido/proteína. La capacitación in vitro indujo una disminución en el contenido de ácidos grasos saturados tanto en las fracciones DRM (P<0,001) como en las no DRM (P<0,01). Los ácidos grasos poliinsaturados aumentaron en los DRM después de la reacción del acrosoma. Todos los tratamientos resultaron en un menor contenido de colesterol y proteínas en las fracciones DRM (P<0,01) y no DRM (P<0,001), y un mayor contenido de GM1 en DRMs (P <0,05). Conclusiones: Los microdominios tipo balsa lipídica se aislaron en una región discreta del gradiente. Su alto contenido de ácidos grasos saturados confiere un entorno altamente ordenado. Su composición se modifica durante la capacitación in vitro y la reacción acrosómica.
Significado general: Estos resultados representan la primera caracterización de DRM de espermatozoides de carnero, y pueden contribuir a una mejor comprensión del mecanismo de adquisición del potencial fecundante de los espermatozoides.