Yosser Zina Abdelkrim
La identificación de nuevas moléculas pequeñas y activas para el tratamiento de las leishmaniasis constituye una prioridad de investigación. En este trabajo ampliamos investigaciones in silico previas y análisis virtuales de pequeñas moléculas dirigidas al factor de iniciación 4A de Leishmania infantum (LieIF) como posible diana farmacológica. LieIF pertenece a la familia DEAD-box de helicasas de ARN. Las proteínas DEAD-box contienen una estructura central altamente conservada con forma de mancuerna que contiene dos dominios enlazados con homología estructural con la de la
proteína A recombinante (RecA). Esta estructura central confiere una afinidad de unión al ARN dependiente de ATP, una actividad ATPasa dependiente de ARN y una actividad de desenrollado del ARN dependiente de ATP. Utilizamos la actividad ATPasa para establecer un ensayo colorimétrico en placas de microtitulación para analizar moléculas que inhiben LieIF. Analizamos cientos de moléculas previamente identificadas mediante análisis virtuales para determinar su capacidad de unirse a sitios en LieIF que eran importantes para la actividad enzimática. Descubrimos un inhibidor interesante: 6-α/β-aminocholestanol con
un valor de CI50 de 150 ± 15 μM para 1 μM de LieIF. Este compuesto también inhibe la actividad helicasa de ARN de LieIF. Los ensayos de helicasa y los experimentos de competencia de ATPasa con los dominios individuales similares a RecA y otras proteínas indican que hay múltiples sitios de unión en LieIF, y que el sitio de unión principal está en el dominio 1 que involucra motivos de unión de ARN conservados. Dos de los diez análogos químicos identificados de 6-α/β-aminocholestanol (6-α-aminocholestanol y 6-ketocolestanol) mostraron efectos inhibidores sobre la actividad ATPasa de LieIF. Se observaron efectos inhibidores similares con eIF4A de mamíferos, pero con diferentes perfiles de reacción. Las tres moléculas mostraron una actividad antileishmanicida contra los promastigotes y amastigotes de los parásitos L. infantum, y mostraron una toxicidad no significativa hacia los macrófagos. Este estudio constituye un primer paso hacia la validación de LieIF como diana farmacológica. Demuestra diferencias bioquímicas entre las proteínas eIF4A de Leishmania y de mamíferos, más notablemente en ensayos de ATPasa que muestran que la rocaglamida afecta a las dos proteínas de manera diferente. Para concluir, este trabajo proporciona una molécula leishmanicida prometedora: 6-aminocolestanol con un valor de IC50 inferior a 1 μM en amastigotes intracelulares, con poca toxicidad y con un índice de selectividad superior a 20. El 6-aminocolestanol constituye una molécula antileishmanicida prometedora que merece más investigación.