Química moderna y aplicaciones

Abstracto

Método HPLC-UV breve y robusto para determinar la concentración sérica de ribavirina sin paso de evaporación

Abdul Rafiq Khan, Ali Al-Othaim, Khalid Muhammed Khan, Shazia Mrtaza, Sara Altraif, Waleed Tamimi, Waqas Jamil e Ibrahim Altraif

Objetivo: La medición de ribavirina (RBV) es importante para el control terapéutico de fármacos en pacientes con hepatitis C. Se desarrolló y validó un método simple y rápido de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) para medir la concentración de ribavirina en muestras de suero sin un paso de evaporación.

Diseño y método: Se mezclaron aproximadamente 500 μl de muestra de suero, 50 μl de estándar interno y tampón de acetato de amonio 20 mM (pH = 8,5) durante 30 segundos y se centrifugaron. El sobrenadante se transfirió a cartuchos de ácido fenilborónico preacondicionados para la extracción en fase sólida. Todos los cartuchos se lavaron dos veces con 1 ml de tampón de acetato de amonio 20 mM al vacío que no excedía de 10 psi. La ribavirina y el estándar interno se eluyeron con 300 μl de ácido fórmico al 3%. Se inyectó una alícuota de 100 μl en el sistema HPLC.

Resultados: El método fue lineal en el rango de 0,1-8,0 mg/l con 0,05 mg/l como límite de detección. El coeficiente de correlación de comparación de métodos fue 0,975 con un valor p de 0,116, lo que muestra una buena reproducibilidad de los resultados. La precisión media se verificó en tres concentraciones diferentes y se encontró que estaba entre 107-110% para los tres niveles. La eficiencia de extracción fue del 65,5% para ribavirina en el rango de 0,1-8,0 mg/l y del 71,2% para el estándar interno a 50 mg/l. Las precisiones intraensayo se determinaron a 0,5, 2,5 y 5,0 mg/l y se encontró que el % CV era 2,2%, 5,0%, 4,5% respectivamente. La reproducibilidad de la inyección en tres niveles fue del 5,5%, 6,1% y 3,3%. La eliminación del flujo por gravedad y el paso de evaporación hicieron que este método fuera más rápido y fácil para el análisis de rutina de muestras de ribavirina.

Conclusión: El método HPLC desarrollado recientemente resultó más rápido, preciso y sensible. Se aplicó para determinar el nivel sérico de ribavirina en pacientes con hepatitis C en nuestro hospital.