Pharmaceutica Analytica Acta

Abstracto

在 100 次纯化循环中，用于纯化单克隆抗体的已建立的亲和层析程序的性能显著提高

威廉姆斯·费罗、鲁道夫·瓦尔德斯、尤蒂米奥·费尔南德斯、亚里塞尔·格瓦拉、叶尼斯利·梅迪纳、塔蒂亚娜·阿尔瓦雷斯、安德烈斯·塔马约、塔蒂亚娜·冈萨雷斯、迈拉·伍德、梅林·拉奥、约德尔维斯·卡尔沃和黛博拉·盖达

Protein A-Sepharose 亲和层析是一种非常成功的纯化免疫球蛋白用于药物的方法。然而，这种方法的层析效率和寿命必须始终根据特定的层析条件（生物来源、缓冲液、流速、抗体特性、温度、蛋白质浓度、清洁方案等）进行调整。本研究旨在证明已建立的亲和层析程序的性能有所改进，该程序用于纯化用于纯化乙肝疫苗活性药物成分的 CB.Hep-1 单克隆抗体 (mAb)。总之，在 150 mM PBS；pH 8.0/100 mM 柠檬酸；pH 3.0 缓冲系统条件下观察到的 mAb 回收率相对较差，这是因为洗脱缓冲液无法完全破坏基质和 mAb 之间的相互作用。在这方面，与基质偶联的配体有助于将 CB.Hep-1 mAb 保留在基质中，而不是通过非特异性相互作用。1.5M 甘氨酸-NaOH/3M NaCl； pH 9.0/200 mM 甘氨酸-HCl；pH 2.5 缓冲系统显著提高了亲和层析回收率，且在 100 次纯化循环中不影响 mAb 纯度、分子均质性、配体泄漏和小鼠 DNA 含量。因此，使用 1.5M 甘氨酸-NaOH/3M NaCl；pH 9.0/200 mM 甘氨酸-HCl；pH 2.5 作为缓冲系统可分别降低 CB.Hep-1 mAb 和乙肝疫苗的成本。