Bioquímica y Bioquímica Analítica

Abstracto

Vía de desdoblamiento lento de la Tk-RNasa H2 hipertermófila examinada mediante proteólisis pulsátil utilizando proteínas mutantes

Kanako Shima, Ai Nagao, Jun Okada, Satoshi Sano y Kazufumi Takano

El desdoblamiento de la ribonucleasa H2 de la arquea hipertermófila Thermococcus kodakarensis (Tk-RNasa H2) es notablemente lento. En trabajos anteriores, se observaron los intermediarios del desdoblamiento de la Tk-RNasa H2, los estados IA, IB, IC e ID, mediante análisis de proteólisis de pulso a 25 °C, donde los estados IB e IC son las formas principales en el proceso de desdoblamiento lento de esta proteína. Aquí, examinamos la vía de desdoblamiento lento de la Tk-RNasa H2 mediante proteólisis de pulso utilizando mutantes. Para la variante estabilizada, D7N, el tiempo de vida de los estados IA e IB disminuyó, pero el estado IC apareció antes a 25 °C, lo que indica la estabilización del estado IC. Los estados IA e IB no se observaron en la variante desestabilizada, L33A, a 25 °C, mientras que en el tipo salvaje estos dos estados desaparecieron a 50 °C. Nuestros resultados sugieren que a temperaturas más altas el estado IC es el estado nativo real de la Tk-RNasa H2, mientras que los estados nativos IA e IB a 25 °C son formas artificiales a temperaturas más bajas.