Salud Bucal y Manejo Dental

Abstracto

Estandarización del aislamiento y expansión de células del tejido conectivo de la mucosa oral

Fernandes LA, Nascimento BL, Lucato-Budziak MC, Figueiredo CM, Carneiro E

Objetivo: El objetivo de este estudio fue establecer un protocolo para el aislamiento y expansión de una población de células fibromesenquimales del tejido conectivo de la mucosa oral para futuros protocolos de bioingeniería. Métodos: Para el aislamiento de fibroblastos y células progenitoras, utilizamos trozos de muestras quirúrgicas de pacientes con indicación de cirugía oral. El protocolo para el aislamiento fue el siguiente: el tejido se lavó con solución salina tamponada con fosfato (PBS) suplementada con antibiótico-antimicótico (PSA). El tejido se colocó en un tubo de ensayo que contenía colagenasa tipo II y se incubó durante la noche en el horno. Después de la incubación, se recolectó la colagenasa y el tejido se lavó nuevamente una vez con PBS + PSA. Posteriormente, se realizó la prueba de Unidades Formadoras de Colonias (UFC). Las células (1,0 × 105 ) se sembraron en una placa de 10 cm² que contenía medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con alto contenido de glucosa, suplementado con suero bovino fetal (FBS) al 10%. Las células se fijaron con formalina al 10% y se tiñeron con violeta de cristal antes de contar las colonias. El ensayo se realizó por triplicado. Resultados: Las células de todas las muestras mostraron una morfología homogénea con una apariencia estrellada característica. La única diferencia estuvo en el número de colonias formadas. Hubo un aumento significativo en el número de colonias formadas el día 1 en comparación con las formadas el día 0, y una disminución significativa en comparación con las formadas el día 2. Conclusión: Fue posible establecer un protocolo para el cultivo primario de fibroblastos derivados de la mucosa oral humana.