Bioquímica y Bioquímica Analítica

Abstracto

Estudios de evolución temporal sobre el impacto de la exposición a bajas temperaturas en los niveles de proteínas y enzimas en larvas de quinto estadio del gusano de seda Eri, Philosamia ricini (Lepidoptera: satuniidae)

Anita Singh, Vivek Kumar Gupta, Nikhat Jamal Siddiqi, Shaily Tiwari, Anita Gopesh y Bechan Sharma

La lactato deshidrogenasa (LDH; EC 1.1.1.27) y la malato deshidrogenasa (MDH; EC 1.1.1.37) son las enzimas implicadas en el metabolismo energético del gusano de seda Eri, Philosamia ricini. Sin embargo, no se han publicado estudios previos sobre el efecto de la exposición a bajas temperaturas en sus niveles en diferentes tejidos del gusano de seda Eri. El presente estudio se centró en los efectos en el curso del tiempo de la exposición a bajas temperaturas (~10 °C) del quinto estadio de P. ricini en los niveles de proteínas y enzimas del metabolismo energético de tres tejidos principales (hemolinfa, glándula de seda y cuerpo graso). Las larvas del gusano de seda Eri, criadas en hojas frescas de la planta de ricino (Ricinus communis), se dividieron en 4 grupos: un grupo de control criado a 25 ± 2 °C junto con tres grupos experimentales criados a 10 ± 1 °C que contenían 50 larvas en cada uno, por duraciones variables (2, 4 y 7 días). El extracto libre de células se preparó centrifugando el homogeneizado de tejido a 9000 g y se utilizó para estimaciones bioquímicas (contenido de proteína total, actividades de lactato deshidrogenasa y malato deshidrogenasa). Para el análisis de isoenzimas, se preparó otro conjunto de homogeneizados (20% p/v) en tampón (0,2 M Tris HCl, pH 7,0) que contenía 0,2 M de sacarosa y 10 mM de EDTA, y se analizaron mediante PAGE nativo seguido de tinción de actividad. Las actividades de la lactato deshidrogenasa y la malato deshidrogenasa mostraron una disminución significativa en la hemolinfa, mientras que en los cuerpos grasos ambas enzimas mostraron un aumento de actividad. En la glándula de seda, la actividad de la lactato deshidrogenasa disminuyó uniformemente, mientras que la actividad de la malato deshidrogenasa aumentó en todas las duraciones de exposición. El análisis de isoenzimas reveló perturbaciones significativas en sus perfiles de expresión. La exposición a bajas temperaturas resultó en la acumulación de contenido proteico en la hemolinfa y el agotamiento en los tejidos de la glándula de seda y los cuerpos grasos. Los cuerpos grasos surgieron como el principal órgano productor de energía en esta condición. La lactato deshidrogenasa y la malato deshidrogenasa mostraron la presencia de solo una isoenzima en todos los tejidos evaluados. El comportamiento de las isoenzimas de la lactato deshidrogenasa y la malato deshidrogenasa hacia las bajas temperaturas varió en diferentes tejidos. Estos resultados sugirieron que las alteraciones en la expresión y las funciones de estas enzimas podrían estar asociadas a la aclimatación de las larvas a bajas temperaturas.