Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Transactivación de la expresión de genes diana mediante SALL4B recombinante: un marcador de células madre pluripotentes

Mengru Yuan, Yun Wang, Zhihua Ren, Wei Dai y Yongping Jiang

SALL4 es un factor de transcripción importante que apoya la expansión de las células madre hematopoyéticas. La expresión de SALL4 también está desregulada en varios tipos de leucemia . Estudios recientes revelan que SALL4B, una isoforma principal de SALL4, está fuertemente modificada por mecanismos postraduccionales y estas modificaciones son críticas para su estabilidad, localización subcelular y actividades transcripcionales. Dada la importancia de SALL4B en el apoyo a la autorrenovación y expansión de las células madre, optimizamos un proceso de expresión y purificación a gran escala para obtener SALL4B utilizando el sistema de vector de expresión de baculovirus. El TAT-SALL4B recombinante se purificó eficientemente por cromatografía de afinidad de níquel en condiciones nativas. La inmunotransferencia confirmó que el SALL4B recombinante estaba altamente expresado y purificado. Como primer paso para probar la actividad biológica del TAT-SALL4B purificado, investigamos si TATSALL4B, directamente suplementado al medio de cultivo, era capaz de ingresar a las células a través del proceso de transducción de proteínas. La microscopía de fluorescencia reveló que la proteína TAT-SALL4B recombinante se localizaba específicamente en el núcleo de una manera dependiente de la concentración y el tiempo. Los ensayos del gen reportero mostraron que la proteína TAT-SALL4B purificada activaba el promotor del gen OCT4, lo que indica que la proteína SALL4B recombinante era transcripcionalmente activa in vivo. En conjunto, nuestros resultados sugieren que la proteína TAT-SALL4B puede proporcionar un factor prometedor para apoyar la expansión ex vivo de las células madre hematopoyéticas .