Revista de Bacteriología y Parasitología

Abstracto

Activación transcripcional por una secuencia similar a URE4 en el promotor central del gen EhPgp1

ME Ramírez, DG Pérez, E Náder y C Gómez

EhPgp1 ​​es uno de los genes de resistencia a múltiples fármacos expresados ​​en trofozoítos resistentes a fármacos de Entamoeba histolytica. Estudios previos en nuestro laboratorio han demostrado que dos sitios C/EBP participan en la activación transcripcional de este gen. Sin embargo, existe otra región relevante que también regula la expresión de EhPgp1 ​​en el clon C2. En este informe proporcionamos evidencia de que la transcripción del gen EhPgp1 ​​está regulada al menos parcialmente por las secuencias repetidas R9 que actúan en cis y la proteína EhEBP1. El análisis estructural de la región de -234 a -197 pb muestra la presencia de dos secuencias repetidas de 9 pb [R9(1) y R9(2)] ubicadas en -226 a -203 pb. El análisis de deleciones y mutaciones de los motivos R9 redujo significativamente la actividad del promotor en los trofozoítos del clon C2. Los experimentos EMSA revelaron la unión específica de proteínas nucleares de E. histolytica a la secuencia R9. Mientras que los ensayos de competencia mostraron que la presencia de más de una secuencia R9 es necesaria para una fuerte interacción proteína-ADN. Además, los experimentos de Western blot con proteínas parcialmente purificadas que interactúan con el motivo R9 y anticuerpos contra EhEBP1, reconocieron una proteína de 28 kDa. Curiosamente, este anticuerpo en ensayos supershift impidió la formación de interacciones proteína-ADN de las secuencias R9 y las proteínas nucleares de la ameba, lo que indica que una de las proteínas que interactúan con el elemento R9 es una proteína similar a EhEBP1. En conclusión, demostramos que los motivos R9 son reconocidos por una proteína EhEBP1 y activan la expresión del gen EhPgp1.