Revista de investigación y terapia con células madre

Abstracto

Transdiferenciación de células madre mesenquimales de rata en neuronas dopaminérgicas para trasplante celular

Ryan M. Welchko, Travis D. Hulse, Sabrina S. Dieffenbach, Gabrielle P. Shall, Huo Wangjing, Leslie R. Siegal, Jared R. Watters, Leveque T. Xavier, Ming Lu, Julien Rossignol, Michael I. Sandstrom y Gary L. Dunbar

Objetivo: El trasplante de progenitores dopaminérgicos embrionarios humanos dentro de los estriados de pacientes con EP ha proporcionado resultados alentadores, pero las preocupaciones éticas y la disponibilidad de tejido limitan este enfoque. El uso de células madre mesenquimales (MSC) proporciona una fuente de células fácilmente disponible, ya que se derivan de tejido adulto. Este estudio in vitro exploró el uso de MSC como fuente de células para la inducción neuronal DA utilizando un solo adenovirus.
Métodos: Nuestro laboratorio desarrolló un nuevo adenovirus que expresa múltiples genes virales 2A que permiten la expresión policistrónica de múltiples genes (Ascl1, Lmx1a y Nurr1) para factores de transcripción que están involucrados en la diferenciación de neuronas DA y utilizó el gen para la proteína fluorescente verde (gfp) para rastrear la transfección. Las MSC se cultivaron con el adenovirus, se monitorearon los cambios morfológicos, así como la expresión de gfp, como se evidenció por microscopía de fluorescencia. La presencia del ADN viral dentro de las células transfectadas se confirmó con PCR, inmunocitoquímica y RTPCR.
Resultados: Las MSC cultivadas con el adenovirus dieron lugar a cambios morfológicos, así como a la expresión de gfp, como se evidenció mediante microscopía de fluorescencia. La presencia del ADN viral dentro de las células transfectadas se confirmó con PCR. Los análisis de inmunocitoquímica y RT-PCR revelaron que las células que expresan gfp tienen co-marcaje nuclear de los factores de transcripción traducidos LMX1a y NURR1, así como una regulación positiva de estos genes, junto con una regulación positiva de los genes diana corriente abajo, como la tirosina hidroxilasa (TH) y el transportador de dopamina (DAT).