Revista de Patología Vegetal y Microbiología

Abstracto

Detección visual del virus de la punta rizada mediante amplificación isotérmica mediada por bucle colorimétrico

Mohammad Amin Almasi, Mehdi Aghapour-ojaghkandi y Saeedeh Aghaei

El virus Curly Top (CTV) en la remolacha azucarera, perteneciente a la familia Geminiviridae, el gen Curtovirus, es un problema considerable en las áreas semiáridas de Irán y otras partes semiáridas del mundo. Existen varios métodos de diagnóstico para detectar el CTV, pero estas técnicas requieren mucho tiempo (entre 3 h y 2 días) y herramientas sofisticadas. El objetivo de este estudio, por primera vez, fue reducir el tiempo necesario para detectar el CTV en la remolacha azucarera, utilizando la técnica de amplificación isotérmica mediada por bucle colorimétrico (LAMP) que requiere solo un baño de agua común o un termobloque. El ADN se extrajo de tejidos de hojas infectadas naturalmente. Las muestras se analizaron para detectar la presencia de especies de Curtovirus mediante reacciones de PCR y LAMP para amplificar el gen de la proteína asociada a la replicación (rep) utilizando cebadores de especies. LAMP se optimizó para amplificar el ADN del CTV en condiciones isotérmicas mediante incubación a 63 °C durante 30 min. Los productos LAMP se detectaron visualmente utilizando los diferentes colorantes. Los productos de amplificación LAMP tenían una apariencia similar a una escalera cuando se sometieron a electroforesis en un gel de agarosa y también los resultados positivos con los diferentes colorantes fueron un cambio de color. Los resultados confirmaron que LAMP con diferentes colorantes proporciona un ensayo rápido y seguro para la detección de CTV en remolacha azucarera. Dado que con otros métodos moleculares, es inevitable equipar a los laboratorios con un termociclador o sistemas detectores costosos, se descubrió que este ensayo es un método molecular simple y rentable que tiene el potencial de reemplazar otros diagnósticos en laboratorios primarios sin la necesidad de equipos costosos o técnicas especializadas. También puede considerarse como un sistema de detección viral alternativo confiable en futuras investigaciones.